Efecto de las urolitinas sobre la angiogénesis en la endometriosis - Simone, Julieta Alejandra (2025)
La endometriosis es una enfermedad ginecológica benigna que se caracteriza por la presencia de tejido endometrial fuera de la cavidad uterina. Se trata de una enfermedad inflamatoria, crónica, estrógeno dependiente y multifactorial cuyos principales síntomas son el dolor y la infertilidad. Las urolitinas son una subfamilia de metabolitos producidos por la microbiota intestinal a partir de elagitaninos y ácido elágico. Los principales metabolitos producidos en humanos son la urolitina A (UA), y la urolitina B (UB). En nuestro laboratorio demostramos por primera vez que el tratamiento in vivo con UB disminuye el tamaño de las lesiones endometriósicas mientras que la UA evita el desarrollo de las lesiones por completo en un modelo murino de endometriosis. Siendo que la formación de nuevos vasos sanguíneos es crucial para el establecimiento, desarrollo y mantenimiento de las lesiones endometriósicas, este trabajo de tesis tiene como objetivo investigar el rol de la UA y la UB sobre la angiogénesis en la endometriosis. Para esto tratamos a la línea celular endometriósica 12z con UA, UB o en condiciones basales y analizamos la expresión del ARNm de distintos factores proangiogénicos por RT-qPCR. Además evaluamos el porcentaje de área vascularizada y el número de vasos sanguíneos en lesiones endometriósicas de ratones Balb/c tratados con UB mediante inmunohistoquímica para CD31. Finalmente ensayamos la acción de los medios condicionados de las células 12z tratadas con UA y UB, así como el efecto directo de las mismas, sobre la angiogénesis en el ensayo de membrana corioalantoidea (CAM) de codorniz. Observamos que el tratamiento con UA provocó una disminución significativa en los niveles de expresión del ARNm de VEGFa (p<0,05), RHOJ (p<0,001), FGF2 (p<0,05), IL1b (p<0,001) e IL6 (p<0,05) en las células 12z en comparación con el basal. Mientras que la UB disminuyó significativamente la expresión del ARNm de RHOJ e IL1b (p<0,05), aunque en menor medida que UA (p<0,01 UA vs. UB). No se observaron cambios significativos en las expresión de HIF1a (p>0,05 UA y UB vs. Basal). Además las lesiones endometriósicas de ratones tratados con UB presentaron una disminución significativa del porcentaje del área vascularizada (p<0,05) y el número de vasos sanguíneos (p<0,05). En el modelo de CAM de codorniz los medios condicionados de las células 12z tratados con UA y UB no tuvieron efectos significativos sobre la angiogénesis, aunque la acción directa de UA provocó un aumento en el número de ramificaciones de vasos sanguíneos (p<0,05 vs. Basal) y UB no tuvo efecto. Como parte complementaria de esta tesis, se llevó a cabo la optimización del ensayo de CAM de codorniz, con el objetivo de mejorar la eficiencia del método y posibilitar la medición de parámetros adicionales relacionados con el desarrollo vascular. Esta optimización estuvo orientada a facilitar la segmentación automatizada de la vasculatura a partir de imágenes, permitiendo así un análisis más profundo y reproducible. En primer lugar, se perfeccionó la técnica de cultivo ex ovo, lo que resultó en un incremento del 69% en la supervivencia embrionaria al final del experimento en comparación con el método previamente utilizado (p<0,01). Además, se implementó una nueva modalidad de administración del estímulo angiogénico, la cual favoreció una mejor visualización y segmentación de los vasos sanguíneos, habilitando su análisis cuantitativo posterior. Como conclusión de esta tesis podemos decir que aunque las urolitinas reducen la expresión de factores proangiogénicos en las células endometriósicas, su impacto funcional sobre la angiogénesis sigue siendo incierto y se requieren más estudios para esclarecer su efecto en el contexto de esta enfermedad compleja y multifactorial. Asimismo, logramos optimizar el ensayo de CAM de codorniz, mejorando la eficiencia del método y abriendo la posibilidad de realizar análisis automatizados y más profundos de la vasculatura.