Comparación de métodos para valoración del colesterol en líquidos biológicos - Guidobono, Héctor Ernesto (1955)
Se ha efectuado el presente estudio con el objeto de seleccionarel método más adecuado de valoración del colesterol para cada uno de los líquidosbiológicos examinados, procurando establecer las condiciones óptimaspara la ejecución de dichas técnicas; como resultado del trabajo experimental 1) Se realizó un estudio comparativo de varias técnicas (especialmentelas de Grigaut, Sackett y Braier-Chouela), para la determinación delcolesterol en sangre, líquido de sondeo duodenal y líquido cefalorraquídeo. 2) Las determinaciones realizadas mediante la técnica de Grigauten suero y plasma humanos, acusaron resultados ligeramente inferiores a losobtenidos con las otras técnicas. 3) Siguiendo la técnica descripta por Braier-Chouela, se obtuvieronvalores más elevados que con las de Grigaut y Sackett, lo que indica posiblementeuna mejor extracción. 4) El método de Braier-Chouela presentó la ventaja de ser de ejecuciónrápida, y permitió obtener una coloración verde perfectamente comparablecon las de las de las soluciones testigos, cuando se trabajó en suero,en plasma o en sangre entera. 5) Empleando la técnica de Sackett se obtuvo con frecuencia unacoloración verde, que cuando se observó a simple vista presentó una tonalidaddenominada de "hoja seca" distinta a las obtenidas con las solucionestestigos. 6) Trabajando con extractos acetónicos de sangre, se estudiaronlos siguientes factores que pueden influenciar el desarrollo de la coloraciónde Liebermann-Burchard: a) Temperatura; b) Tiempo; c) Luz; d) Cantidadde los reactivos y forma de añadir los mismos; e) Estado del colesterol libreo combinado). Como resultados de estos ensayos se aconseja: a) Realizar la extracción del colesterol siguiendo la técnica descriptapor Braier-Chouela. b) Efectuar la reacción de Liebermann-Burchard a una temperatura lo máspróxima posible a 22°C. c) Realizar la lectura de la reacción entre los 12' y los 14', pués eseste el lapso óptimo para el desarrollo de la coloración. d) Mantener los tubos en la oscuridad durante el desarrollo dela coloración en la reacción de Liebermann-Burchard. e) Los reactivos (20 ml. de anhídrido acético - l ml. de ácidosulfúrico) deben mezclarse antes de añadirlos a la soluciónclorofórmica de colesterol; la mezcla mencionada,conservada en la heladera, puede utilizarse hasta 60' despuésde haber sido efectuada. 7) No hemospodido reproducir los resultados de lasexperiencias realizadas por Reinhold en 1935, que le permitieron valorarel colesterol libre y el combinado trabajando a bajas temperaturas;hemos realizado las determinaciones entre O°C y 2°C, como indicael autor citado anteriormente, no habiendo obtenido coloraciónverde aún después de 60' de iniciada la reacción. 8) Además de los métodos indicados en el párrafo 1.,se efectuó un estudio comparativo del método de Zlatkis, Zak y Boyle,habiendo obtenido los siguientes resultados: a) El método nos ha dado resultados más altos que los métodosde Grigaut, Sackett y Braier-Chouela. b) Cuando en los sueros examinados el valor de la bilirrubinemiasobrepasó los 10 mgrs. por mil, se observó que seobtenían datos aún más elevados, lo cual aumentó la divergenciade los resultados obtenidos con este método y conlos de Grigaut, Sackett y Braier-Chouela. c) Cuando no se empleó ácido acético "pro-análisis", se produjouna turbiedad que impidió la comparación. 9) Se efectuaron determinaciones en líquidos de sondeoduodenal. En Bilis A y Bilis C se efectuó una comparación entre lastécnicas de Grigaut y de Braier-Chouela, obteniéndose resultados aceptables y semejantes con ambas técnicas. 10) Con Bilis B se compararon las técnicas de Grigaut, Braier-Chouela, Deulofeu-Bavio y Bloor. Siguiendo las técnicas descriptaspor Grigaut y Braier-chouela se obtuvieron coloraciones débiles ode tonalidades distintas a las de los testigos: Con las técnicas de Deulofeu-Bavio y de Bloor se obtuvieron buenas coloraciones y resultadoscomparables. El método de Bloor resultó más rápido y simple que elde Deulofeu-Bavio. 11) Se efectuaron determinaciones en líquido cefalorraquídeosiguiendo las técnicas de Grigaut, Sackett y Braier-Chouela,habiendo encontrado en líquidos normales cifras comprendidas entre 0,0020 y 0,0045 grs. por mil. 12) En líquidos cefalorraguídeos patológicos se encontraronen todos los casos cifras superiores a las encontradas enlíquidos normales. 13) Al comparar las diferencias técnicas en líquidoscefalorraquídeos, se observó que al igual a lo encontradoen sangre el método de Grigaut acusó resultados más bajosque con los otros métodos; los valores más altos se obtuvieronsiguiendo la técnica de Braier-Chouela.