Abstract:

En el presente trabajo se estudió el género Polyporus s. str. en el Cono Sur de América. Para ello, se dividió su tratamiento en 4 partes: l) morfología; 2) ensayos de compatibilidad; 3) estudios isoenzimáticos y 4) taxonomía numérica. Se analizaron los caracteres macro- y micromorfológicos de 350 colecciones y 88 holotipos de los Herbarios K, PC, UPS, LPS, BAFC, ICN y SP. Se hicieron cruzamientos intra- y interespecificos de l44 cultivos monospóricos y lO cultivos polispóricos. Se estudiaron 42 aislamientos dicarióticos, 42 monocarióticos y 34 cruzamientos entre ellos mediante la electroforesis horizontal en geles de poliacrilamida, para seis actividades enzimáticas: EST, 6PGD, IDH, MDH, SHDH y SOD. Se analizaron 44 bandas totales. Por otra parte, se hizo un análisis numérico de los patrones de bandas isoenzimáticas y de los caracteres morfológicos. Los resultados de los ensayos de compatibilidad y estudios isoenzimáticos corroboraron aquellos obtenidos en el análisis morfológico. Además, en el análisis numérico se pudo establecer buena correlación entre los datos moleculares y los morfológicos. Este trabajo permitió identificar 20 especies y una variedad en el área estudiada. Estas fueron separadas en 5 subgéneros: Polyporus, Melanopus, Polyporellus, Favolus y Austropolyporus subgen. nov.

In the present work, the genus Polyporus s. str. in the “Southern Cone of America was studied. For this, the analysis was divided into 4 parts: l) morphology; 2) compatibility tests; 3) isoenzymatic studies and 4) numerical analysis. The macro and microscopic characters of 350 collections and 88 holotypes from the Herbaria K, PC, UPS, LPS, BAFC, ICN and SP were examined. Intra- and interspecífic pairings of l44 single-Spore cultures and 10 polyspore cultures were made. Forty two dikaryotic isolates, 42 monokaryotic isolates and 34 pairings were examined by horizontal polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) for six enzymatic activities: EST, 6PGD, IDH, MDH, SHDH and SOD. A total of 44 bands were analysed. On the other hand, a numerical analysis of the isoenzymatic patterns and the morphological characters was undertaken. The results of the compatibility tests and isoenzymatic studies, corroborated those furnished by morphological characters. By analysing numerically the isoenzymatic patterns and the morphological characters, a good correlation between molecular and morphological data was established. This research allowed us to identify 20 species and one variety in the area under study. These were distributed among 5 subgenera: Polyporus, Melanopus, Polyporellus, Favolus and Austropolyporus subgen. nov.

Author affiliation: Borges da Silveira, Rosa Mara. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Abstract:

Fasciolosis, a parasitic zoonosis of intrahepatic location, is caused by the trematode Fasciola hepatica. Its control is mainly based on the use of the anthelminthic Triclabendazole (TCBZ). The indiscriminate use of this drug has favored the development of anthelmintic resistance. The Glutation S-Transferases (GSTs) are multifunctional enzymes involved in the detoxification of xenobiotics and endogenous compounds using conjugation with endogenous glutathione. Recently, it has been shown an active participation of this family of enzymes in the detoxification of TCBZ related to the phenomenon of resistance. In F. hepatica, eight isoenzymes of the GST are present. Since it is well known that different isoenzymes do not necessarily have the same metabolic activity, this study evaluated the cytosolic activity of mu and pi GST isoenzymes in TCBZ resistant (Sligo and Oberon strains) and TCBZ susceptible (Cullompton strains) of F. hepatica. The results obtained in this study confirm that, although both isoenzymes are involved in different processes of detoxification in F. hepatica, only the GSTmu isoenzyme is involved in the manifestation of resistance to TCBZ.

Author affiliation: Fernandez, Vanesa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina

Author affiliation: Ortiz Oblitas P.. Universidad Nacional de Cajamarca; Perú

Author affiliation: Solana, María Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina. Ministerio de Ciencia. Tecnología e Innovación Productiva. Agencia Nacional de Promoción Cientifíca y Tecnológica; Argentina

Author affiliation: Solana, Hugo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina

Abstract:

Prosopis es un género que presenta gran importancia desde el punto de vista económico, ecológico y evolutivo. Habita en las principales zonas áridas y semiáridas del mundo y en base a su morfología ha sido dividido en cinco secciones denominadas Prosopis, Anonychium, Monilicarpa, Strombocarpa y Algarobia. Esta última incluye 30 especies de las cuales la mayor parte habitan en América, con el principal centro de diversidad en Argentina. Algunas especies de esta sección hibridan frecuentemente en la naturaleza dando lugar a individuos con fenotipos intermedios, difíciles en algunos casos de determinar. En este trabajo se analizaron marcadores bioquímicos y moleculares en poblaciones de P. glanadulosa, P. velutina, P. alba, P. nigra, P. vinalillo, P. alpataco, P. caldenia, P. ruscifolia, P. flexuosa, P. chilensis, P. affinis, P. kuntzei de Algarobia, P. reptans de Strombocarpa y P. argentina de Monilicarpa. Se estudiaron poblaciones naturales mediante las técnicas de electroforesis de isoenzimas y RAPD con el objeto de identificar loci diagnóstico, estimar la variabilidad y analizar la estructura poblacional. Se compararon poblaciones naturales de diferente subcontinentes pertenecientes a Algarobia junto con P. reptans (Strombocarpa) y P. argentina (Monilicarpa). Los resultados señalaron que P. velutina y P. kuntzei son las únicas que presentaron loci isoenzimóticos diagnósticos. Las especies Norteamericanas P. grandulosa y P. velutina no presentaron bandas RAPD diagnósticas con los “primers” ensayados. Los niveles de variabilidad genética estimados en las poblaciones Norteamericanas son semejantes a los de las especies Sudamericanas de la misma sección; y las poblaciones presentan las misma variantes isoenzimóticas. Los niveles de variabilidad genética de P. reprans (Strombocarpa) y P. argentina (Monilicarpa) no difieren entre sí, aunque son significativamente menores que las de las especies de Algarobia. La diferenciación genética entre las poblaciones de la sección Monilicarpa es menor a la presentada por las especies de Algarobia estudiadas. Como consecuencia, el flujo génico estimado entre las poblaciones de P. argentina es mayor que el de las especies de Algarobia. Un estudio de individuos agrupados por familias fue realizado mediante electroforesis de isoenzimaspara inferir el sistema de apareamiento en siete especies de la sección Algarobia. Los resultados mostraron que las especies presentan en la mayoría de los casos fecundación cruzada pero que hasta un 28% de autofecundación puede ocurrir (tm varió entre 0.72 y 1). El valor promedio en todas las especies aquí estudiadas es de 15%. Las tasas de fecundación cruzada variaron entre los árboles dentro de las poblaciones y la mayoría de los individuos analizados (semillas) dentro de cada familia eran hermanos completos. Se realizó un estudio de RFLP utilizando como sonda 27.7 kb de cpDNA heterólogo de Nicotina tabacum en 11 especies del género. Los resultados no mostraron variación intraespecífica en ningún caso y sólo permitieron diferenciar a P. reptans y a P. kuntzei de las restantes especies de Algarobia estudiadas (P. alba, R nigra, P. vinalillo, P. alpataco, P. caldenia, P. ruscifolia, P. flexuosa, P.glandulosa, P. affinis). Por último, las relaciones filogenéticas entre las especies fueron reconstruidas mediante métodos de distancia y parsimonia a partir de las frecuencias alélicas isoenzimáticas, de las secuencias correspondientes al intergén TrnD-TrnT(cpDNA) y de las secuencias de los espaciadores internos transcriptos de ADN ribosómico (ITS-1 e ITS-2). Los fenogramas obtenidos a partir de los datos de enzimas señalaron que P. reptans (Strombocarpa), P argentina (Monilicarpa) y P. kuntzei son las especies mas diferenciadas. A pesar de que los cladogramas de cpDNA y de ADNr resultaron incongruentes, presentan consistencia. El orden relativo de divergencia señalado en ambos cladogramas concuerda con el nivel de diferenciación genética en los fenogramas. Además, ni los fenogramas ni los cladogramas están de acuerdo con la clasificación morfológica en series propuesta para este grupo.

Prosopis is a very important genus from the economic, ecological and evolutionary point of view. It occupies the main arid and semi-arid areas of the world and, based on the morphology, its species have been divided into five sections denominated Prosopis, Anonychium,Monilicarpa, Strombocarpa and Algarobia. The latter includes 30 species, most of which are American, with the main diversity center in Argentina. Some species of this section frequently hibridise in the nature producing individuals with intermediate phenotypes that sometimes are difficult to determine. In this work biochemical and molecular markers were analyzed in populations of P. glandulosa, P. velutina, P. alba, P. nigra, P. vinalillo, P. alpataco, P. caldenia, P. ruscifolia, P. flexuosa, P. chilensis, P. affinis, P. kuntzei of Algarobia, P. reptans of Strombocarpa and P. argentina of Monilicarpa. Natural populations were studied by means of isoenzyme electrophoresis and RAPD techniques, in order to identify diagnostic loci, to estimate the variability and to analyze the structure of populations. Populations of species from different subcontinents belonging to Algarobia were compared, together with P. reptans (Strombocarpa) and P. argentina (Monilicarpa).The results indicated that P. velutina and P. kuntzei are the only ones which showed isoenzymatic diagnostic loci. The North American species, P. glandulosa and P. velutina, did not present diagnostic RAPD bands with the primers here used. Genetic variability estimates in populations of North American species of Algarobia are similar to those of the South American ones of the same section, and they share most isoenzymatic alleles. P. reptans (Strombocarpa) and P. argentina (Monilicarpa)do not differ from each other in genetic variability, but their variability is significantly lower than that of species of Algarobia. The genetic differentiation among populations in the section Monilicarpa is lower than in the species studied of Algarobia. Thus, the estimated gene flow among populations of P. argentina is higher than those of Algarobia species. A study of individuals grouped by families was carried out by isoenzyme electrophoresis to estimate parameters of the mating system in seven species of the section Algarobia. The results showed that species are mostly outcrosser but up to 28% of selfing can occurs (tm varied between 0.72 and 1). The average value in all the species here studied is of 15%. Outcrossing rates vary among the trees within the populations and most of the analyzed individuals(seeds) within each family are full sibs. A study of RFLP using a heterologous cpDNA probe of Nicatiana tabacum (27.7 kb) was carried out in 11 species of the genus. The results did not show intraspecific variation in any of the species studied. Only P. reptans and P. kuntzei could be distinguished from the remaining studies species of Algarobia (P. alba, P. nigra, P. vinalilla, P. alpataco, P. caldenia, P. ruscifolia, P. flexuosa, P.glandulosa, P. affinis). Finally, the phylogenetic relationships among species were reconstructed through distance and parsimony methods from isoenzymatic allelic frequencies, the sequences corresponding to the intergenic region TrnT-TrnD(cpDNA) and the sequences of internal transcribed spacers from ribosomic DNA (ITS-1 and ITS-2). The phenograms obtained from the enzyme data indicated that P. reptans (Strombocarpa), P. argentina (Monilicarpa)and P. kuntzei are the most differentiated species. Although the cpDNA and rDNA cladograms were incongruent, they present some consistence. The relative divergences of basal nodes in both cladograms are consistent with the level of genetic differentiation in the phenograms. Furthermore, none of the trees agrees with the morphological classification of proposed series for this group.

Author affiliation: Bessega, Cecilia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Abstract:

En el presente trabajo se estudiaron 134 aislamientos dicarióticos mediante la electroforesis horizontal en geles de poliacrilamida, para ocho actividades enzimáticas: AAT, ACP, AKP, EST, MDH, MNR, PRX y SOD. Se analizaron 94 bandas totales, y con el fin de discernir micelios individuales, se implementaron tests de incompatibilidad somática. Por otra parte, se examinaron los caracteres macro- y micromorfológicos, tanto al MO como al MEB, de ca. 200 especímenes, incluyendo 28 holotipos de los Herbarios BPI, H, L, PC, NY, FH, K, PH, SP, BAFC y LPS. Analizando numéricamente los patrones de bandas isoenzimáticas y los caracteres morfológicos, se pudo establecer cierta correlación entre los datos moleculares y los morfológicos. Se observaron varios fenotipos alozímicos en cada sistema enzimático. No se encontraron bandas diagnósticas para especies determinadas morfológicamente. Sin embargo, se hallaron bandas diagnóstico en el ámbito de los dos subgéneros, Ganoderma y Elfvingia, corroborando los resultados proporcionados por los caracteres morfológicos. En total, se detectó en el área bajo estudio, la presencia de nueve especies del subgénero Ganoderma y ocho especies del subgénero Elfvingia.

In the present work 134 dikaryotic isolates of Ganoderma were examined by horizontal polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) for eight enzymatic activities: AAT, ACP, AKP, EST, MDH, MNR, PRX and SOD. A total of 94 bands were analysed. In order to discern fungal individuals somatic incompatibility tests were used. On the other hand, both macro- and microscopic structures of ca. 200 specimens were examined and in the latter case both with LM and SEM, which involved the study of 28 holotypes from the Herbaria BPI, H, L, PC, NY, FH, K, PH, SP, BAFC and LPS. By analysing numerically the isoenzymatic patterns and the morphological characters, a certain correlation between molecular and morphological data was established. The zymograms showed that within each enzyme system several allozyme phenotypes could be observed. The enzymatic systems analysed failed to yield diagnostic bands for each morphologically defined group. However, diagnostic bands for the two large subgenera, Ganoderma and Elfvingia, were encountered. Thus corroborating the results furnished by morphological characters. In total, the presence of 9 species of the subgenus Ganoderma and 8 species of the subgenus Elfvingia, was recognized for the area under study.

Author affiliation: Gottlieb, Alexandra Marina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Abstract:

1. Precision-cut liver slices are one of the in vitro models used in studies concerning xenobiotic metabolism. Sparse information on this field is actually available for cattle and other veterinary species. 2. The aim of the current work was to study the effect of dexamethasone (DEX) on the gene expression and function of CYP3A23 (in rat), CYP3A28 (in cattle) and the transcriptional factors involved in their regulation. 3. DEX (at 100 mM) up-regulated CYP3A23 mRNA (3.2-fold, p¼0.028) in rat liver slices after 12 h culture, whereas the gene expression profiles of transcriptional factors involved in CYP3A regulation were unaffected. A CYP3A-dependent enzyme activity (triacetyl-oleandomycin N-demethylase) increased 3.4-fold (p50.05) in rat liver slices cultured in the presence of DEX. 4. The protocol used for rat liver slices was used as reference to study the expression of a CYP3A isoenzyme in cattle liver slices. Oppositely, DEX did neither affect the gene expression profile of CYP3A28 nor the CYP3A activity tested in cattle liver slices. 5. The data reported here are a further contribution to demonstrate the usefulness of liver slices as an in vitro tool for studies on the expression and function of xenobiotic metabolizing enzymes in cattle and in other ruminant species.

Author affiliation: Maté, María Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tandil. Centro de Investigacion Veterinaria de Tandil; Argentina

Author affiliation: Ballent, Mariana. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina

Author affiliation: Larsen, Karen Elizabeth. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tandil. Centro de Investigacion Veterinaria de Tandil; Argentina. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires; Argentina

Author affiliation: Lifschitz, Adrian Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tandil. Centro de Investigacion Veterinaria de Tandil; Argentina

Author affiliation: Lanusse, Carlos Edmundo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tandil. Centro de Investigacion Veterinaria de Tandil; Argentina

Author affiliation: Virkel, Guillermo Leon. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tandil. Centro de Investigacion Veterinaria de Tandil; Argentina

Abstract:

En este estudio se realizaron dos análisis diferentes dentro del género Dichroplus. El primero involucra un análisis microevolutivo entre especies de Dichroplus elongatus. Se midió entonces la variabilidad intra e interpoblacional en siete poblaciones de Dichroplus elongatus localizadas en las Provincias de Tucumán y de Buenos Aires utilizando marcadores enzimáticos y de fragmentos de ADN amplificados al azar (RAPDs). Al estudiar la estructura poblacional por regiones (provincias) y globalmente se observó una tendencia hacia un exceso de homocigotas dentro de las poblaciones como se esperaría en poblaciones subestructuradas. La diferenciación entre poblaciones es significativa para tres loci enzimáticos, en concordancia con lo esperado para alelos que muestran una distribución clinal de sus frecuencias (Singh y Rhomberg, 1987). Hay cuatro lineas de evidencia que sugieren causas alternativas al "contacto secundario" (interacción entre deriva y migración) para explicar los patrones de variación direccional encontrados para dos loci en Dichroplus elongatus. En primer lugar, si se encuentran ejes concordantes para diferentes loci, el flujo génico en gran escala podría ser responsable de la variación clinal de las frecuencias alélicas; pero si, como en el caso de D. elongatus se encuentran diferentes variables en asociación con distintos loci entonces se debe invocar a la selección, excepto que estos loci se encuentren ligados (Barbujani 1988). Nuestros resultados apoyarían la hipótesis selectiva ya que Aat-1 y Pep-1 estan correlacionados con diferentes variables (Lat, Long, T.Min y T.Max: T.Max.Abs y T.Min.Abs respectivamente) sin mostrar ninguna correlación concordante con ninguna de las nueve variables estudiadas. En segundo lugar, el fenograma construido a partir de las distancias genéticas no se vinculan de acuerdo con lo esperado considerando las distancias geográficas. Concordantemente, la matriz de distancias geogróficas no esta correlacionada con la de distancias genéticas. En tercer lugar, el flujo génica estimado seria lo suficientemente elevado como para enmascarar las diferencias en las frecuencias alélicas si estas fueran originadas solamente por deriva genética. Por último, el patron de variación encontrado se mantiene incluso al incluir poblaciones muestreadas en distintos años. Esto sugiere que de alguna manera la variación clinal encontrada es estable en el tiempo. Un gradiente temporalmente estable debe ser mantenido por algún tipo de selección, de lo contrario el gradiente desaparecería. De esta manera, los resultados obtenidos sugieren la existencia de un probable efecto adaptativo de algunos loci alozímicos, que estaría determinado en última instancia por variables ambientales como la temperatura mínima, relacionadas con la latitud. A partir de los datos de variabilidad resultante del analisis de marcadores de ADN amplificados al azar se desprende que la variabilidad obtenida mediante isoenzimas no difiere significativamente de la obtenida mediante RAPDs. Si muchos de los productos de amplificación obtenidos mediante RAPDs representan ADN repetitivo deberíamos esperar niveles mas altos de variabilidad con marcadores RAPD que con isoenzimáticos. La ausencia de disparidad entre ambos estimadores es sugerida como una posible evidencia indirecta de la cantidad de ADN repetitivo presente en un genoma en particular. El valor de Fst calculado a partir de RAPDs es mucho mayor que el calculado a partir de datos alozímicos. Los primeros por ser considerados marcadores genéticos neutros daría más exactitud al valor de Fst comparado con uno que surge del calculo utilizando loci alozímicos que muestren alguna evidencia de no neutralidad. En los fenogramas construidos a partir de datos de RAPDs, las poblaciones se vinculan de acuerdo con lo esperado por las distancias geográficas. Este resultado no es consistente con los resultados alozímicos previos. Nuevamente esto podría deberse al uso de loci enzimóticos con una posible función selectiva y reforzaría la noción de neutralidad de los marcadores RAPD (que dan como resultado distancias genéticas y geográficas concordantes). Realizando un análisis macroevolutivo se llevaron a cabo también estudios sistemáticos dentro del género Díchroplus a través del análisis de los polimorfismos para fragmentos de restricción del ADN mitocondrialcon el finde llevar a cabo una reconstrucción filogenética dentro del género. Se desprende que a pesar que S. lemniscattase dispone naturalmente como grupo externo, tal como se esperaba de acuerdo a los datos morfológicos, el resto de los datos moleculares compilados no se corresponden con la clasificación taxonómica inferida para este grupo. La propuesta para un estudio mas exhaustivo sería la de incluir caracteres provenientes de genes nucleares y comparar las filogenias obtenidas con los tres métodos, construyendo matrices que incluyan todos los caracteres. A pesar de que los datos moleculares superan a los morfológicos en número generalmente son muy uniformes, dando como resultado pocos árboles. Se aplicaría entonces la combinación de caracteres, descartando la partición, ya que estudios que combinen ambos enfoques pueden maximizar la cantidad y utilidad de la información y darnos una visión mas comprensible de la evolución de los organismos.

In this study two different analysis were performed in the genus Dichroplus. The first one involves a micrevolution model analysis between populations of Dichroplus elongatus. Within and between population differentiation was measured in seven populations of Dichroplus elongatus located in Tucumán and Buenos Aires through enzyme variation and randomly amplified polymorphic DNA (Rapds). When studying population structure for two different arrangements (divided in regions and globally) a tendency towards homozygote excess was observed, as expectad in stuctured populations. Differentiation between populations showed to be significant for three loci, concordntly with what is expected for loci displaying clinal distribution for allele frecuencies. There are four lines of evidence suggesting causes other that secoundary contact (i.e. interaction between migration and genetic drift) to explain the observed directional patterns of variation for two loci in Dichroplus elongatus. First, if concordant axes are found showing concordant oriented patterns of gene frequencies for genetically independent markers, this could only be accounted for by a systematic cause, such as gene flow. On the other hand if, as in the case of Dichroplus, when different variables are associated for different loci then selection must be invoqued, unless these loci are linked. Our results support the selection hypothesis, because Aat-1 and Pep-1 are correlated with different variables (Lat, Long, Min.T. and Max.T.; Abs.Max.T. and Abs.Min.T. respectively) showing no concordant correlation with any of the nine variables studied. Second, the phenetic tree based on genetic distances does not fit with the expected according to geographical distances, as would be expected if genetic differentition answered solely to migration and genetic drift. Concordantly, genetic distances are not correlated with geographical distances. Third, the estimated gene flow should be high enough to mask differences of allelic frequencies due solely to genetic drift. Finally, the pattern of variation is maintained even including populations sampled in different years suggesting that the clinal variation is somehow temporally stable. A stable gradient must be maintained by selection of some sort, otherwise the gradient would have presumably eroded by now. The results obtained suggest the existence of an adaptative effect for some allozyme loci, which would be determined by environmental variables related to latitude. From the variability estimates obtained from RAPD loci we can observe that the variability derived from isozymes is simmilar to that obtained from RAPD data. Two possible explanations for this concordance are supplied in this report. In most species, considerably more variation can be found to exist in terms of nucleotide sequence changes in noncoding or repetitive DNA than in coding DNA. If indeed many of the amplification products represent repetitive DNA, then higher levels of variability should be expected with RAPD markers than with allozyme ones. Would not the disparity or similarily between both variability estimates hence constitute an indicator of the amount of repetitive DNA present in a particular genome? The total Fst estimate calculated using Rapd data yields a higher value. The fact that RAPDs are genetic markers of relative phenotypic neutrality would grant more accuracy to this estimate when compared to that calculated using some isozyme loci that display clinal variation (or some evidence of non-neutrality). Cluster analysis of Nei's genetic distances revealed an overall agreement with the geographical location of the populations studied . This is not consistent with the previous allozyme study where no correspondence was found between genetic and geographical distances. Again this would answer to the use of loci displaying clinal variation (with a possible selective role) for the non correspondent isozyme genetic distances and would reinforce the notion of RAPDs as neutral markers displaying genetic distances that agree with geographical distances. With the purpose of reconstructing the phylogeny of the genus Dichroplus, six species were analyzed by means of restriction fragment length polymorphisms of mitochondrial DNA and their patterns were compared using cladistic methods. The observed relations are that even though S. lemniscatta is naturally located as an outgroup —what is expected from morphological data - the rest of the data collected do not agree with the previous taxonomic clasification infered from morphological evidence. Further studies should have to be performed in order to study characters from nuclear genes and compare the phylogenies obtained with the three methods (morphology, mitochondrial DNA and nuclear DNA). Building matrices including all the characters, even though molecular data are more numerous than morphological data these are usually very homogeneous, resulting in very few trees. The combination of characters should therefore be applied, ruling out character separation. Such studies that combine the two approaches can thereby maximize both information content and usefulness and provide a truly comprehensive view of biotic evolution.

Author affiliation: Sequeira, Andrea Silvia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

Abstract:

Many biotechnological processes pursuing sustainability search effective, inexpensive and environmentally friendly alternatives to replace conventional practices. Lignocellulolytic white rot fungi can serve for this task through their enzymatic system including laccase (Lac). One of purposes of biotechnological enzymes production processes is usually to find the best growing and secretion conditions for a particularly selected fungus. In this work, different fungi isolated from the Misiones rainforest (Coriolus versicolor f. antarcticus BAFC-266, Ganoderma applanatum strain F, Phlebia brevispora BAFC-633 and Pycnoporus sanguineus BAFC-2126) were incubated at different temperatures (25, 29, 33°C) and pHs (3.5, 4.5, 5.5) under static conditions for 7, 10 and 14 days to evaluate their growing ability and Lac production. Results revealed specific favorable conditions for growth and protein secretion depending on the fungus under consideration, making necessary to adjust these parameters for each particular case. The combined effect of these cultivation parameters showed a marked influence on the secreted Lac activity by P. brevispora BAFC 633, with the highest activity (~ 240 U/l) at 29ºC and pH 4.5 at the 10th day of cultivation. The presence of Lac isoenzymes also depended on the pH, temperature and time of cultivation for the different tested fungi.

Author affiliation: Fonseca, Maria Isabel. Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Exactas Químicas y Naturales. Departamento de Bioquímica Clínica. Laboratorio de Biotecnología Molecular; Argentina;

Author affiliation: Fariña, Julia Inés. Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Exactas Químicas y Naturales. Departamento de Bioquímica Clínica. Laboratorio de Biotecnología Molecular; Argentina; Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico - CONICET - Tucumán. Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos (i); Argentina;

Author affiliation: Sanabria, Irma Lorena. Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Exactas Químicas y Naturales. Departamento de Bioquímica Clínica. Laboratorio de Biotecnología Molecular; Argentina;

Author affiliation: Villalba, Laura. Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Exactas Químicas y Naturales. Departamento de Bioquímica Clínica. Laboratorio de Biotecnología Molecular; Argentina;

Author affiliation: Zapata, Pedro Dario. Universidad Nacional de Misiones. Facultad de Ciencias Exactas Químicas y Naturales. Departamento de Bioquímica Clínica. Laboratorio de Biotecnología Molecular; Argentina;

Abstract:

The Arabidopsis thaliana genome contains two genes encoding NAD-MEs [NAD-dependent malic enzymes; NAD-ME1 (TAIR accession number At4G13560) and NAD-ME2 (TAIR accession number At4G00570)]. The encoded proteins are localized to mitochondria and assemble as homo- and heterodimers in vitro and in vivo. In the present work, the kinetic mechanisms of NAD-ME1 and -ME2 homodimers and NAD-MEH (NAD-ME heterodimer) were studied as an approach to understand the contribution of these enzymes to plant physiology. Productinhibition and substrate-analogue analyses indicated that NADME2 follows a sequential ordered Bi-Ter mechanism, NAD being the leading substrate followed by L-malate. On the other hand, NAD-ME1 and NAD-MEH can bind both substrates randomly. However, NAD-ME1 shows a preferred route that involves the addition of NAD first. As a consequence of the kinetic mechanism, NAD-ME1 showed a partial inhibition by L-malate at low NAD concentrations. The analysis of a protein chimaeric for NAD-ME1 and -ME2 indicated that the first 176 amino acids are associated with the differences observed in the kinetic mechanisms of the enzymes. Furthermore, NAD-ME1, -ME2 and -MEH catalyse the reverse reaction (pyruvate reductive carboxylation) with very low catalytic activity, supporting the notion that these isoforms act only in L-malate oxidation in plant mitochondria. The different kinetic mechanism of each NAD-ME entity suggests that, for a metabolic condition in which the mitochondrial NAD level is low and the L-malate level is high, the activity of NAD-ME2 and/or -MEH would be preferred over that of NAD-ME1.

Author affiliation: Tronconi, Marcos Ariel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Rosario. Centro de Estudios Fotosintéticos y Bioquímicos (i); Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas; Argentina

Author affiliation: Gerrard Wheeler, Mariel Claudia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Rosario. Centro de Estudios Fotosintéticos y Bioquímicos (i); Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas; Argentina

Author affiliation: Maurino, Verónica G.. Universitat Zu Koln; Alemania

Author affiliation: Drincovich, Maria Fabiana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Rosario. Centro de Estudios Fotosintéticos y Bioquímicos (i); Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas; Argentina

Author affiliation: Andreo, Carlos Santiago. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Rosario. Centro de Estudios Fotosintéticos y Bioquímicos (i); Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas; Argentina

Abstract:

Sixteen strains belonging to three families of the Rhizobiales order (Bradyrhizobiaceae, Phyllobacteriaceae and Rhizobiaceae) were evaluated according their specific growth rates (μ) and the activity of intracellular α-esterase and β-esterase isoenzymes. The average esterase activity of 48 isoenzymes assayed belonging to five strains with low (μ max=0.08-0.12h -1), four medium (μ max=0.13-0.22h -1) and seven high (μ max=0.24-0.28h -1) growth rate values were 22.1±4.3; 8.7±2.2 and 3.9±1.7Ug -1 respectively. An inversely proportional relationship between the activity of the whole pattern of esterases and μ max was found. Our results illustrate a feature of intracellular esterases, ascribable in a variety of cellular functions, which might be related to characteristics μ max of legume infecting bacteria.

Author affiliation: Grassano, Alicia Ester. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de La Pampa. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química; Argentina

Author affiliation: Ronchi, Ana Lia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de La Pampa. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química; Argentina

Author affiliation: Garcia, Patricia Graciela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de La Pampa. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química; Argentina

Author affiliation: Mazzaferro, Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de La Pampa. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química; Argentina

Author affiliation: Breccia, Javier Dario. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de La Pampa. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química; Argentina