Estudio de la expresión y características biológicas de fenotipos inducidos in vitro de neutrófilos humanos.

Authors
Rodríguez, Fernando Marcos
Publication Year
2019
Language
Spanish
Format
doctoral thesis
Status
Versión aceptada para publicación
Director/a de tesis
Novak, Ivón Teresa Clara
Ávila, Rodolfo E.
Nates, Silvia V.
Description
Tesis-Doctor en Medicina y Cirugía-Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Médicas, 2019 111 p.
Los polimorfonucleares neutrófilos (PMN) desempeñan un rol clave en la inmunidad innata frente a infecciones especialmente bacterianas y fúngicas, pero en la actualidad estos leucocitos por su potencial versatilidad en cuanto a sus funciones, han sido propuestos como células moduladoras de la inmunidad adaptativa. Se han descripto algunos PMN neutrófilos en sitios de inflamación que expresan fenotipo de célula presentadora de antígenos (CPA) —se consideran a las moléculas B7 (B7-1, CD80 y B7-2, CD86) y a CMH clase II (HLA-DR) como marcadoras del fenotipo CPA de PMN neutrófilo— y este aspecto constituye un área de interés científico y ha motivado este trabajo de investigación científica. El objetivo de esta Tesis es el estudio de la expresión y características biológicas de fenotipos inducidos in vitro de PMN neutrófilos humanos. Materiales y métodos: En las muestras se realizaron ensayos con estimuladores clásicos y con uno no clásico para generar los fenotipos. La expresión de moléculas de los diferentes fenotipos y la liberación de trampas extracelulares neutrófilas (NETs) se evidenciaron mediante inmunofluorescencia. Las observaciones de interacciones celulares de contacto se realizaron mediante microscopía óptica y electrónica. Los fenotipos inducidos in vitro con estimuladores surgen de la comparación con el “fenotipo PMN neutrófilo control” de las muestras apareadas sin estimulación. Para el desarrollo del trabajo se utilizaron muestras donadas por el Banco de Sangre del Instituto de Hematología de la UNC, en anonimato, con consentimiento informado y aprobación del proyecto por el Comité de Ética del Hospital Nacional de Clínicas, FCM, UNC, registro 169/13. Resultados: se observaron las siguientes características del fenotipo inducido in vitro de “PMN neutrófilo-CPA”. a) expresa en superficie las moléculas HLA-DR (CMH) y moléculas coestimuladoras B7 (CD80 y CD86); b) presenta una vida media en cultivo que varía según los activadores (con LPS: 48 hs, con OVA: 60 hs); c) es capaz de generar NETs con activadores clásicos (LPSy fMLP) y no clásico (OVA); d) las NETs pueden contener moléculas coestimuladoras B7 (CD80 y CD86); e) las NETs que contienen moléculas coestimuladoras promueven aumento de sinapsis inmunes. Por otro lado, se evidenciaron las siguientes características del fenotipo inducido in vitro de “PMN neutrófilo CD4-CD45RO”: a) expresa en superficie las moléculas CD4 y CD45RO; b) presenta una vida media en cultivo de 30 minutos con los activadores LPS, fMLP y OVA; c) es capaz de generar NETs con activadores clásicos y uno no clásico; d) las NETs pueden contener moléculas CD4 y CD45RO. Conclusiones: Se considera que el desarrollo de este trabajo científico aporta nuevos datos sobre las importantes funciones inmunológicas que llevan a cabo las células implicadas. Los hallazgos con respecto a la expresión de moléculas características de las CPAs profesionales en PMN neutrófilos, permiten definirlos como potenciales CPAs. En este estudio sobre la expresión y características biológicas de fenotipos de PMN neutrófilos inducidos in vitro se halló la expresión de moléculas coestimuladoras B7 y del CMH II: HLA-DR en las NETs lo que otorga una nueva perspectiva a las trampas extracelulares influenciando en el entorno celular y adquiere gran importancia por la posibilidad de ruptura de la autotolerancia, tal como sucede en enfermedades autoinmunes. Estos resultados pueden ser tenidos en cuenta como posibles blancos terapéuticos. Además, por otra parte, el hallazgo de la expresión de moléculas no convencionales del fenotipo PMN neutrófilo-CD4, CD45RO y la liberación de NETs conteniendo dichas moléculas pueden sentar las bases de futuras investigaciones donde se evalúe su significado funcional. Esto tiene interés por ejemplo en el estudio de la infección por HIV ya que podría influir en la biodistribución del mismo, siendo CD4 el receptor primario de este virus. La posibilidad de los PMN neutrófilos que en determinadas condiciones desempeñen roles de CPA comprometiendo la vía de coestimulación B7-1 (CD80) / B7-2 (CD86): CD28 – CTLA 4 en las diferentes subpoblaciones de células T tendría importancia en la inmunoregulación y la patogénesis de diversas enfermedades donde las NETs también pueden estar implicadas.
2021-05-24
Subject
Research Subject Categories::MEDICINE
Research Subject Categories::MEDICINE::Microbiology, immunology, infectious diseases
Biología Celular
Research Subject Categories::MEDICINE::Microbiology, immunology, infectious diseases::Microbiology::Bacteriology
Infecciones Bacterianas
Neutrófilos--inmunología
Técnicas In Vitro
Fenotipo
Access level
Open access
License
Repository
Repositorio Digital Universitario (UNC)
Institution
Universidad Nacional de Córdoba
OAI Identifier
oai:rdu.unc.edu.ar:11086/11600