An effective and simplified DO-stat control strategy for production of rabies glycoprotein in Pichia pastoris

Authors
Picotto, Leandro Daniel; Sguazza, Guillermo Hernán; Tizzano, Marco Antonio; Galosi, Cecilia Monica; Cavalitto, Sebastian Fernando; Pecoraro, Marcelo Ricardo
Publication Year
2017
Language
English
Format
article
Status
Published version
Description
The glycoprotein (G-protein) of rabies virus is responsible for viral attachment to the host cell surface and induces virus neutralization antibodies. In the present study, the G-protein gene of rabies virus CVS strain was cloned, sequenced and expressed in the yeast, Pichia pastoris, as a secreted protein, using a simplified DO-stat control feeding strategy. This strategy involves the addition of methanol when the dissolved oxygen (DO) level rises above the setpoint avoiding methanol accumulation and oxygen limitation. The G-protein expression was evaluated by SDS-PAGE, ELISA, and western blot assays. Like native G-protein, the recombinant G-protein was found reactive when it was challenged against specific antibodies. The data indicate that the recombinant G-protein can be easily expressed and isolated, and may be useful as a safe source in the production of diagnostic kits and subunit vaccines to prevent rabies.
Fil: Picotto, Leandro Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Fermentaciones Industriales. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Fermentaciones Industriales; Argentina
Fil: Sguazza, Guillermo Hernán. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Microbiología. Cátedra de Virología; Argentina
Fil: Tizzano, Marco Antonio. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Microbiología. Cátedra de Virología; Argentina
Fil: Galosi, Cecilia Monica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Microbiología. Cátedra de Virología; Argentina
Fil: Cavalitto, Sebastian Fernando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Investigación y Desarrollo en Fermentaciones Industriales. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Centro de Investigación y Desarrollo en Fermentaciones Industriales; Argentina
Fil: Pecoraro, Marcelo Ricardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Microbiología. Cátedra de Virología; Argentina
Subject
DO-STAT
GLYCOPROTEIN
PICHIA PASTORIS
RABIES VIRUS
Otras Ciencias Veterinarias
Ciencias Veterinarias
CIENCIAS AGRÍCOLAS
Access level
Restricted access
License
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
Repository
CONICET Digital (CONICET)
Institution
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
OAI Identifier
oai:ri.conicet.gov.ar:11336/49422