Analytical Performance of a Multiplex Real-Time PCR Assay Using TaqMan Probes for Quantification of Trypanosoma cruzi Satellite DNA in Blood Samples

Authors
Duffy, Tomas; Cura, Carolina Inés; Ramírez, Juan C.; Abate, Teresa; Cayo, Nelly M.; Parrado, Rudy; Diaz Bello, Zoraida; Velazquez, Elsa Beatriz; Muñoz Calderón, Arturo; Juiz, Natalia Anahí; Basile, Joaquín; Garcia, Lineth; Riarte, Adelina; Nasser, Julio Rubén; Ocampo, Susana B.; Yadon, Zaida E.; Torrico, Faustino; Alarcón de Noya, Belkisyole; Ribeiro, Isabela; Schijman, Alejandro Gabriel
Publication Year
2013
Language
English
Format
article
Status
Published version
Description
Background: The analytical validation of sensitive, accurate and standardized Real-Time PCR methods for Trypanosoma cruzi quantification is crucial to provide a reliable laboratory tool for diagnosis of recent infections as well as for monitoring treatment efficacy. Methods/Principal Findings: We have standardized and validated a multiplex Real-Time quantitative PCR assay (qPCR) based on TaqMan technology, aiming to quantify T. cruzi satellite DNA as well as an internal amplification control (IAC) in a single-tube reaction. IAC amplification allows rule out false negative PCR results due to inhibitory substances or loss of DNA during sample processing. The assay has a limit of detection (LOD) of 0.70 parasite equivalents/mL and a limit of quantification (LOQ) of 1.53 parasite equivalents/mL starting from non-boiled Guanidine EDTA blood spiked with T. cruzi CLBrener stock. The method was evaluated with blood samples collected from Chagas disease patients experiencing different clinical stages and epidemiological scenarios: 1- Sixteen Venezuelan patients from an outbreak of oral transmission, 2- Sixty three Bolivian patients suffering chronic Chagas disease, 3- Thirty four Argentinean cases with chronic Chagas disease, 4- Twenty seven newborns to seropositive mothers, 5- A seronegative receptor who got infected after transplantation with a cadaveric kidney explanted from an infected subject. Conclusions/Significance: The performing parameters of this assay encourage its application to early assessment of T. cruzi infection in cases in which serological methods are not informative, such as recent infections by oral contamination or congenital transmission or after transplantation with organs from seropositive donors, as well as for monitoring Chagas disease patients under etiological treatment.
Fil: Duffy, Tomas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones En Ingeniería Genética y Biología Molecular; Argentina
Fil: Cura, Carolina Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular; Argentina
Fil: Ramírez, Juan C.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular; Argentina
Fil: Abate, Teresa. Universidad Central de Venezuela. Instituto de Medicina Tropical; Venezuela
Fil: Cayo, Nelly M.. Universidad Nacional de Jujuy. Instituto de Biologia de la Altura; Argentina
Fil: Parrado, Rudy. Universidad San Simón; Bolivia
Fil: Diaz Bello, Zoraida. Universidad Central de Venezuela. Instituto de Medicina Tropical; Venezuela
Fil: Velazquez, Elsa Beatriz. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud. Instituto Nacional de Parasitología; Argentina
Fil: Muñoz Calderón, Arturo. Universidad Central de Venezuela. Instituto de Medicina Tropical; Venezuela
Fil: Juiz, Natalia Anahí. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular; Argentina
Fil: Basile, Joaquín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular; Argentina
Fil: Garcia, Lineth. Universidad San Simón; Bolivia
Fil: Riarte, Adelina. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud. Instituto Nacional de Parasitología; Argentina
Fil: Nasser, Julio Rubén. Universidad Nacional de Salta. Facultad de Ciencias Naturales; Argentina
Fil: Ocampo, Susana B.. Universidad Nacional de Jujuy. Instituto de Biologia de la Altura; Argentina
Fil: Yadon, Zaida E.. Pan-American Health Organization; Estados Unidos
Fil: Torrico, Faustino. Universidad San Simón; Bolivia
Fil: Alarcón de Noya, Belkisyole. Universidad Central de Venezuela. Instituto de Medicina Tropical; Venezuela
Fil: Ribeiro, Isabela. Drugs and Neglected Diseases Initiative; Suiza
Fil: Schijman, Alejandro Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular; Argentina
Subject
CHAGAS DISEASE
DNA EXTRACTION
TRYPANOSOMA CRUZI
SATELLITE DNA
Q-PCR
Bioquímica y Biología Molecular
Ciencias Biológicas
CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS
Access level
Open access
License
https://creativecommons.org/licenses/by/2.5/ar/
Repository
CONICET Digital (CONICET)
Institution
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
OAI Identifier
oai:ri.conicet.gov.ar:11336/3965